蜜蜂细菌病害病原的鉴定

2024年07月02日已有人阅读病友分享我想学蜂疗

→ 推荐阅读

鉴定细菌种类，可进行形态观察（如细菌的形态、大小、鞭毛数目及着生部位等）和染色反应（尤其是革兰氏染色反应），观察该细菌的培养特性与生理性状等。

鉴定蜜蜂细菌病害的通常方法是直接检查，可取病组织少许，于载玻片上的水滴中，用镊子或解剖针轻轻触动使其少量病原细菌自由散落几个，制成悬浮液，而后进行涂片染色镜检，也可先将供检材料进行表面消毒，再于研钵中研碎，再加入适量无菌水制成悬浮液，再取悬浮液少许涂片染色镜检。

利用悬浮液进行接种试验

若供检材料陈旧，杂菌多，宜在接种创先进行病菌的分离和培养。细菌的分离和培养的方法很多，通常有倾注平板法和平板划线法两种。

平板倾注法：当检验材料内含有两种或两种以上的细菌时，即可借溶化的琼脂将细菌冲散；待琼脂冷凝后，分散的细菌就被固定在原处而形成菌落。这样，也能达到分离纯化的目的。根据材料中存在细菌密度的大小，在倾注平板前，可用生理盐水进行稀释。稀释可在甲、乙、丙三个试管内，分级进行。首先取0.1毫升混合菌液至盛有9.9毫升生理盐水的甲管内；混合均匀后，再从甲管内取0.1毫升混合菌液至盛有9.9毫升生理盐水的乙管内。同法，再从乙管内取0.1毫升混合菌液至盛有9.9毫升生理盐水的丙管内。如此稀释后，甲、乙、丙三管和稀释度为10的负二次方、10的负四次方及10的负六次方。接种时，用消毒的吸管，分别从甲、乙、丙三管内、各取0.1毫升菌液放至消毒的培养皿内，然后，再往三个空培养皿内注入已溶化且冷至45℃左右的琼脂，使呈一高层。再轻轻振摇培养皿，使稀释菌液与溶化的琼脂混合均匀，接种完中后，即可放入温箱内进行培养。

平板划线法：划线的方式很多，其目的就是要求借划线将混杂的细菌在琼脂平板上分散开，使每个细菌能固定在一点，生长繁殖成单个菌落，以达到分离纯化的目的。具体方法：先用经过火焰烧消毒的接种环，待冷却后，取一环菌液，在无菌条件下，接种于琼脂平板上，并来回滑动，涂成一薄膜（约占平板总面积的1/10）。再将接种环取出、进行灼烧、待冷后，再将接种环通过薄膜处作连续划线（划线面积以约占平板面积的1/5～1/6为宜）。划线完毕，放入温箱中进行培养。经过24h后取出，仔细观察平板表面，菌落的形状、大小、边缘、表面结构、透明度和颜色等。