蜜蜂分子遗传标记限制性片段

2024年07月01日已有人阅读病友分享我想学蜂疗

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人们利用形态特征、生物学特性、蛋白质(如同工酶)多态性等作为蜂种鉴定的指标，对蜜蜂的种及种以下的亚种、品种或品系的分类鉴定进行深入研究。分子生物技术的发展给蜂种的分类和签定提供新的方法和手段，与传统方法相比，分子遗传标记具有以下优点：①检测不受年龄和性别的限制，不受表达组织、发育阶段或外界环境的影响．这样可对那些受性别控制或影响的性状可以直接进行DNA多态性分析；⑦分严遗传标记不存在对生物体的有害或次级效应；②分子遗传标记反应的蜂种之间的特异性信息非常丰富，为准确进行种以下的蜂种鉴定和分类提供依据。

限制性内切酶能识别DNA顺序上由特定碱基组成的识别位点(即限制性位点)，如果DNA上存在这种碱基序列，限制性内切酶就可以在识别位点切开DNA。因此，限制性内切酶能格很长的DNA分子降解成许多长短不一的小片段，片段的数目和长度反映了DNA分子上限制性酶切位点的分布。

对于特定的DNA限制性内切酶组合，所产生的片段是特异的，它能作为某一DNA(或含有该DNA的生物)的特有“指纹”。由于染色体DNA分子很长，用典型的限制性内切酶来酶解蜜蜂的核DNA会产生数百万个DNA片段，其大小变化是连续的，如把酶解的DNA进行电泳，用溴乙锭染色后，无法区别单个的片段，因为如此之多的DNA片段紧密排列为连续的一片。

然而，各个限制性片段在凝胶中还是分开的，只是肉眼不能分辨，需要借助于更为复杂的技术程序才能符不同蜂种或同一蜂种不同品种的限制性片段的差异区分开来。这些技术程序包括Southern吸印，DNA探针的制备，同位素或非同位素标记以及DNA分子杂交。由于核DNA的RFLP不能直接观察，通常采用染色体DNA的小片段作为探针(Probe)通过专一性很高的DNA—DNA杂交去检测各个DNA片段。这些探针能够检测出酶解产生的复杂核DNA片段混合物中与其同源的限制性片段。

要采用这一技术，必须事先准备一系列作探针用的染色体DNA片段。为了获取作探针用的DNA片段，可从所要研究的生物中提取DNA，经限制性内切酶酶解，产生较小的片段(通常2—5kb)。

但是直接分离各个限制性片段非常困难，为此可采用分子克隆技术中建立基因文库的方法，通常把各个限制性片段连接到细菌质粒中，然后用重组的质粒转化细菌细胞，细菌在生长分裂的同时复制了质粒，这样只要分离质粒，就能提供大量的某一生物的某种DNA限制性片段，用作杂交探针。带有某一片段的菌系保持很长—段时间。因此，同一探针能反复地使用，或提供给其他的研究者共享。