蜜蜂细胞学鉴定方法

2024年07月01日已有人阅读病友分享我想学蜂疗

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蜜蜂染色体组型和带型分析是细胞学研究的主要内容。蜜蜂染色体组型研究方法：以意蜂为例，镊取封盖后8—10天的雄蜂蛹，将雄蜂蛹放入试管，置于34—35℃水浴中用0．01％秋水仙素浸泡18—24h；左手用镊子压住雄蜂蛹腹部末端第三节，右手用镊子拉出末端两节，再轻轻挤压腹部，两圈透明丝状精巢使显露出来；用0.85％生理盐水将取出的精巢漂洗两次，去掉脂肪体等杂物。

然后移动离心管，用眼科剪充分剪碎精小管；加生理盐水至3m1，先用500r／min离心lmin，去除底层的杂物，再改用1000r／min离心3min，去掉上层的悬浮物，将剩下的沉淀物加生理盐水到3m1，用吸管冲混，重复上法离心一次，这样便制得干净的细胞悬浮液；加低渗液(0.45％枸椽酸钠)至3m1，低渗50min。

将低渗过的细胞于2000r／min离心10min，去掉上清液，加固定液至2m1，用吸管冲混均匀，再加固定液(甲醇：冰醋酸＝3：1)至5m1固定5min以上，然后2000r/min离心10min，去上清液，待制片用；滴加固定液于上述离心管至0.5m1，用吸管吸冲均匀，取干净载玻片置酒相中浸泡5—10min，然后取出凉干，置冰箱中冷冻5min左右取出，用吸管吸取上述制好的细胞悬浮液，滴于载玻片上，每片滴两滴，对其猛吹，令其均匀分散，然后让其自然干燥，并贴好标签；用吉姆萨(Giemsa)染色液染色30min，取出用自来水细流冲洗干净，待干燥后滴一滴染液于破片上，盖上干燥洁净的盖片，用滤纸吸去多余的染液，这样染色体玻片就制好了。

将染色体玻片拿到显微镜下观察摄影；将冲洗好的底片制成幻灯片，进行投影放大，然后用圆规、直尺进行长短臂测量，计算出臀比和相对长度；染色体的排列次序是先按相对长度由大到小排列，相对长度误差在0.8％以内视力相同，再对相对长度相同的值，根据染色体臂比均值的变化趋势进行排列，这样就可获得染色体组型图。

染色体的带型分析包括C一带法、G一带法、Q—带法等，其研究方法是先制好高质量的染色体标本片，经预处理后，进行染色观察，显微摄影，再根据染色体相对长度，从大到小进行排列．分析各染色体上的条带。