蜂毒对前列腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的影响的实验研究

2016年09月05日已有人阅读病友分享我想学蜂疗

原标题：蜂毒对前列腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的影响的实验研究

作者：吕立国成永明吴巧玲张娴陈志强白遵光王昭辉代睿欣

来源：广东省中医院，1泌尿外科2传统疗法中心3肿瘤内科4中心实验室

前列腺癌是世界范围内发病率排名第二的男性恶性肿瘤[1]，确诊时多为晚期，内分泌治疗后几乎都会发展为去势抵抗性前列腺癌（CRPC），中位生存期短。如何延缓晚期前列腺癌进展为CRPC、如何延长CRPC生存期，是世界范围内的治疗难点。中医药治疗CRPC逐渐成为研究的热点。初步临床研究显示，以蜂毒为主要作用成分的蜂针疗法在控制前列腺癌进展方面有一定的作用[2]，初步的实验研究显示，蜂毒（FD）对前列腺癌细胞具有凋亡诱导作用[3，4]，现将我们近年来实验研究发现的蜂毒对前列腺癌细胞抑制和凋亡诱导作用机理总结如下。

1.压迫症状

逐渐增大的前列腺腺体压迫尿道可引起进行性排尿困难，表现为尿线细、射程短、尿流缓慢、尿流中断、尿后滴沥、排尿不尽、排尿费力，此外，还有尿频、尿急、夜尿增多、甚至尿失禁。肿瘤压迫直肠可引起大便困难或肠梗阻，也可压迫输精管引起射精缺乏，压迫神经引起会阴部疼痛，并可向坐骨神经放射。

2.转移症状

前列腺癌可侵及膀胱、精囊、血管神经束，引起血尿、血精、阳痿。盆腔淋巴结转移可引起双下肢水肿。前列腺癌常易发生骨转移，引起骨痛或病理性骨折、截瘫。前列腺癌也可侵及骨髓引起贫血或全血象减少。

1 蜂毒能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖或能促进细胞凋亡。

通过MTT实验，由图1可见，与空白对照组比较，蜂毒1，2，4μg/mL组，OD值无明显差异，蜂毒8，12，16，20，24μg/mL组OD值均降低，差异均有统计学意义（P<0.05），提示蜂毒能抑制PC-3细胞增殖或能促进细胞凋亡。

注：与对照组比较， *P<0.05。

图1 蜂毒对前列腺癌PC-3细胞活性的影响

2 蜂毒能诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡。

2.1 流式细胞术检测细胞凋亡。由图2可见，与空白对照组比较，蜂毒1，2，4μg/mL组，无明显差异，蜂毒8μg/mL作用24h后细胞凋亡明显增多，差异有统计学意义（P<0.05）。

图2流式细胞术检测蜂毒对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

2.2荧光染色法。由图3可见，与空白对照组比较，蜂毒1，2，4μg/mL组无明显变化，蜂毒8μg/mL作用24h后在荧光显微镜下能见凋亡细胞增多。

3 蜂毒诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制。

3.1 通过影响Ca2+通路，导致前列腺癌细胞内Ca2+超载，诱导其凋亡。

流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度，可以看到，在蜂毒4，8μg/mL处理后，细胞内Ca2+浓度明显增高，与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），尤其以蜂毒8μg/mL组最为显着。

图4蜂毒对前列腺癌PC-3细胞内Ca2+浓度影响

细胞凋亡的调控由十分复杂的信号网络系统控制，目前已知有三条主要信号通路：线粒体通路、内质网通路、死亡受体通路，大部分与钙离子有关，钙离子在细胞凋亡中起着十分重要的作用，在钙离子信号与肿瘤细胞凋亡的三条通路中，存在相互促进、互为因果的促凋亡蛋白酶，加速肿瘤细胞凋亡。细胞内Ca2+浓度长期增高是钙离子参与凋亡的原因之一，放疗、多柔比星、5-氟尿嘧啶等药物的化疗等诸多治疗措施引起的细胞凋亡需要钙离子内流，当胞内钙水平达到一定阈值后可激活细胞凋亡[5]。

前列腺癌的发展与细胞内Ca2+浓度密切相关。研究[6]证实，在激素依赖型前列腺癌向激素非依赖型转化过程中，前列腺癌细胞内Ca2+浓度下降。而破坏细胞内的钙稳态，可以诱导前列腺癌细胞的凋亡[7]。通过升高胞质内的Ca2+浓度，可激活相关凋亡活化因子，促进前列腺癌细胞的凋亡[8]。NF-κB通路是前列腺癌细胞凋亡通路之一[9]，细胞内Ca2+浓度升高可以下调细胞核内NF-κB蛋白表达水平，从而诱导前列腺癌细胞凋亡，由此可见，细胞内Ca2+超载与其他凋亡通路是相辅相成的。蜂毒注射液可以引起前列腺癌细胞内Ca2+浓度明显升高，由此推测，通过引起前列腺癌细胞内Ca2+超载诱导其凋亡，是蜂毒注射液作用途径之一。

3.2 蜂毒通过上调p53和p27蛋白的表达，诱导前列腺癌细胞凋亡。

实验研究证实，蜂毒作用后，PC-3细胞p53和p27蛋白的相对表达量明显增加。p27是细胞周期的负性调控因子，被认为是抑癌基因。在正常细胞和肿瘤细胞中，p27通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶的活性负性调节细胞周期的进程，抑制细胞增殖。也有研究发现p27参与细胞分化调控，诱导细胞凋亡。由此推测，蜂毒肽可以通过调控p27表达诱导PC-3细胞凋亡。p53是一种抑癌基因，能够通过多种机制阻止肿瘤发展。也是一种转录因子，也是一种生长抑制性蛋白，在前列腺癌发生发展中起重要作用。我们的实验研究发现，蜂毒肽处理后p53表达明显升高，由此推测，通过调控p53表达诱导PC-3细胞凋亡，是蜂毒肽诱导PC-3细胞凋亡的作用途径之一。

3.3 蜂毒可以通过上调Caspase3的表达，诱导前列腺癌细胞凋亡。

我们的实验研究发现，前列腺癌细胞在蜂毒作用后，Caspase3含量增高，前列腺癌细胞凋亡增加。

Caspases是在细胞凋亡中起重要作用的同源蛋白，是细胞凋亡的中心环节，对细胞凋亡起着重要作用。其中caspase-3是细胞凋亡过程中激活的关键激酶，也是细胞凋亡的主要效应因子，是细胞凋亡的执行者，是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶，也是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分。Caspase-3蛋白与进展性前列腺癌细胞的耐凋亡特征、恶性程度和复发性有关。Caspase-3的低阳性率与进展性前列腺癌的发生、发展和预后有密切联系[10]。Caspase-3活性下降，与激素非依赖性前列腺癌发生和进展过程相关[11]。本实验显示，蜂毒肽作用后caspase-3含量增高，由此推测，caspase-3通道也是蜂毒肽对PC-3细胞发挥凋亡诱导作用的途径之一。