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蜂疗实验CIA大鼠造模方法之探索

2018年03月14日已有人阅读病友分享我想学蜂疗

周颖芳1 崔韶阳2 袁恺3
（广州医科大学附属第三医院，广东广州，510150
2 广州中医药大学深圳医院，3.云南中医药大学）

类风湿性关节炎（RA）是临床常见的一种自身免疫性疾病，以慢性、进行性、对称性外周关节病变为特点。稳定而成功的实验动物模型对开展RA研究具有非常重要的意义，因此，本实验专门针对蜂疗中进行II型胶原诱导的关节炎（CIA）大鼠模型的建模的探索。通过建立CIA大鼠模型，评价建模效果，比较不同品系大鼠在实验条件下的关节炎发生率以及病变程度。

一、实验动物
SPF级SD大鼠和Wistar大鼠各12只。使用苦味酸在动物体表不同部位进行染色以示动物号，同时饲养笼具贴上相应标签辅助识别。对购入大鼠均检疫7 d，期间每日检查大鼠一次，如发现不健康的动物立即剔除，选用健康动物进行饲养。

二、主要实验仪器与试剂：
电子天平、迷你振荡器。0.9%氯化钠注射液、戊巴比妥钠、冰醋酸、牛Ⅱ型胶原蛋白、弗氏完全佐剂、弗式不完全佐剂、纯化水。

三、实验方法
1. 造模

（1）II型胶原蛋白制备：取冰醋酸0.3 g，加入纯化水溶解并定容至100 mL，常温储存备用。取抗原5 mg，加入2.5 mL 0.05M醋酸，4℃下过夜振摇溶解，配制为胶原含量为2 mg/mL的溶液。

（2）CIA模型制备：使用Hamilton注射器于动物尾根部皮下注射胶原-CFA乳剂，每只大鼠注射200 μL。首次免疫7 d后，进行增强免疫。使用Hamilton注射器于动物尾根部注射胶原-IFA乳剂，每只大鼠注射100 μL。

2. 关节炎指数评分

每天观察大鼠状况及关节肿胀情况，于首次免疫后的7 d、14 d、21 d、28 d及处死前对大鼠关节炎进行评分，评分标准见表1。
表1 CIA大鼠模型关节炎指数评分标准
关节情况   分值
正常   0
轻度，但有明显的踝或腕关节红肿，或明显的单个足趾红肿，无关受累的足趾数量   1
中度踝或腕关节红肿   2
严重的整个足爪包括足趾的红肿   3
多关节受累的肢体最大限度的炎症   4

四、结果

1. 一般临床观察
首次免疫后1 w和2 w，各组大鼠腕关节和膝关节肉眼观察均未见病变。首次免疫后3 w，SD大鼠和Wistar大鼠均出现不同程度的关节炎表现。其中SD大鼠主要表现为膝关节肿胀，后肢触地无力，行走缓慢；Wistar大鼠主要表现为腕关节肿胀，膝关节肿胀较腕关节轻，后肢触地未见明显异常。首次免疫后4 w，SD大鼠和Wistar大鼠关节炎症状均有加重。SD大鼠表现为膝关节肿胀，个别大鼠关节皮肤出现焦痂，大部分大鼠后肢无法触地，行走表现为拖行。Wistar大鼠关节炎症状较SD大鼠轻，主要表现为腕关节肿胀，行动尚自如。

2.关节炎指数评分
依照表1中CIA大鼠关节炎指数评分标准，各组大鼠在各时间点的关节炎指数进行评分。在首次免疫后2 w、3 w和4 w时，SD大鼠的关节炎指数均显著高于Wistar大鼠（模型2组），差异具有统计学意义（P< 0.01）。

五、小结

本实验分别以SD大鼠和Wistar大鼠为实验对象，以牛Ⅱ型胶原结合弗氏完全佐剂/不完全佐剂间隔1 w分2次在大鼠尾部进行皮下注射制备CIA模型。大鼠关节炎症表现、CIA指数结果均显示SD大鼠关节炎病症重于Wistar大鼠，在进行进一步研究时，可根据实验目的选择适当品系的大鼠进行实验。